IPS培養基是用于hPSC維持培養的無(wú)飼養層、無(wú)動(dòng)物源成份的培養基。該培養基含有用于hPSC維持培養所需的最基本成份，為多能干細胞培養提供了一種更為簡(jiǎn)單的配方，下面我們來(lái)詳細看看。

　　IPS培養基制備的基本方法和注意事項

　　1、IPS培養基配方的選定

　　同一種IPS培養基的配方在不同著(zhù)作中常會(huì )有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規定進(jìn)行配制外，一般均應盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的，加以選用，記錄其來(lái)源。

　　2、IPS培養基的制備記錄

　　每次制備IPS培養基均應有記錄，包括IPS培養基名稱(chēng)，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號，最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制好的IPS培養基一同存放、以防發(fā)生混亂。

　　3、IPS培養基成分的稱(chēng)取

　　IPS培養基的各種成分必須精確稱(chēng)取并要注意防止錯亂，一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?，每稱(chēng)完一種成分即在配方面軍做出記號，并將所需稱(chēng)取的藥品一次取齊，置于左側，每種稱(chēng)取完畢后，即移放于右側。*稱(chēng)取完畢后，還應進(jìn)行一次檢查。

　　4、IPS培養基各成份的混合和溶化

　　IPS培養基所用化學(xué)藥品均應是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入IPS培養基中，使細菌不易生長(cháng)。使用不銹鋼鍋加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現有焦化現象、該IPS培養基即不能使用，應重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分*溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補足。

　　5、IPS培養基pH的初步調正

　　因IPS培養基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì )有所變化，IPS培養基各成分*溶解后，應進(jìn)行PH的初步調正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì )有顯著(zhù)的升高。因此，對這個(gè)步驟，操作者應隨時(shí)注意探索經(jīng)驗、以期能掌握IPS培養基的最終PH，保證IPS培養基的質(zhì)量。PH調整后，還應將IPS培養基煮沸數分鐘，以利IPS培養基沉淀物的析出。

　　6、IPS培養基的過(guò)濾澄清

　　液體IPS培養基必須澄清，瓊脂IPS培養基也應透明無(wú)顯著(zhù)沉淀，因此，須要采用過(guò)濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體IPS培養基可用濾紙過(guò)濾法，濾紙應折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。

　　瓊脂IPS培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過(guò)濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過(guò)濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復過(guò)濾。如過(guò)濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的IPS培養基放入大的三角燒瓶?jì)?，裝入量不得超過(guò)燒瓶容量的1/2，每1000mlIPS培養基加入1~2個(gè)雞蛋的蛋白，強力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過(guò)濾即可。

　　7、IPS培養基的分裝

　　IPS培養基的分裝，應按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時(shí)能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面IPS培養基時(shí)，分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于IPS培養基的*滅菌。每批IPS培養基應另外分裝20mlIPS培養基于一小玻璃瓶中，隨該批IPS培養基同時(shí)滅菌，以為測定該批IPS培養基最終pH之用。

　　8、IPS培養基的滅菌

　　一般IPS培養基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種IPS培養基制備方法中，如無(wú)特殊規定，即可用此法滅菌。

　　某些畏熱成分，如糖類(lèi)，應另行配成20%或更高的濃液，以過(guò)濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無(wú)菌操作技術(shù)、定量加于IPS培養基。明膠IPS培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無(wú)菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50°C左右的IPS培養基中。

　　瓊脂斜面IPS培養基應在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時(shí)，擺置成適當斜面，待其自然凝固。

　　9、IPS培養基的質(zhì)量測試

　　每批IPS培養基制備好以后，應仔細檢查一遍，如發(fā)現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被IPS培養基沾染等、均應挑出棄去。并測定其最終pH。

　　將全部IPS培養基放入36±1°C恒溫箱培養過(guò)夜，如發(fā)現有菌生長(cháng)，即棄去。

　　用有關(guān)的標準菌株接種1~2管或瓶IPS培養基，培養24~48小時(shí)，如無(wú)菌生長(cháng)或生長(cháng)不好。應追查原因并重復接種一次，如結果仍同前，則該批IPS培養基即應棄去，不能使用。

　　10、IPS培養基的保存

　　IPS培養基應存放于冷暗處，能放于普通冰箱內。放置時(shí)間不宜超過(guò)一周，傾注的平板IPS培養基不宜超過(guò)3天。每批IPS培養基均必須附有該批IPS培養基制備記錄副頁(yè)或明顯標簽。